混乱的欧洲战争使查理一世(他以其神圣罗马帝国查理五世称号而更闻名于世)一直到1534年才重整力量去征服拉普拉塔流域。当时葡萄牙人的行动似乎在企图向南美洲掠取更多的领土，因而变得十分讨厌。查理对巴拉圭必须有所作为。在那里索利斯和卡沃特都失败了，年老的佩德罗。德.门多萨可能会得到成功，即使他没有开拓巴拉圭“荒芜之地”的雄心，他却有个人的运气。在赐以可与王公相比的土地、人民、拉普拉塔河领地、印第安人和所有一切的鼓励下，门多萨带领十一艘船、‘千二百人、牡马和扎马以及远征中所需要的物品，于1535年8月启航。他必须建筑三座堡垒，同秘鲁取得联系，并进行殖民。同他一起去的有他的兄弟迭戈.德.门多萨作为舰队指挥，还有许多高贵的放荡者、冒险家、流氓以及诚实人：胡安.德.阿约拉斯、多明戈.马丁内斯.德.伊拉拉、胡安.德.萨拉萨尔.德.埃斯皮诺萨和另外一些人—他们的传记是阿根廷和巴拉圭的早期历史，在旅途中幸存下来的七十二匹牡马和牡马的重要性并不次于这些人。